Tên đề tài luận án: Nghiên cứu biểu hiện kháng nguyên hemagglutinin (HA) tái tổ hợp của virus cúm A/H5N1 và đánh giá tinh sinh miễn dịch trên gà.
Chuyên ngành: Hóa sinh học Mã số: 62 42 01 16
Họ và tên Nghiên cứu sinh: Võ Viết Cường
Họ và tên cán bộ hướng dẫn: GS. TS. Trương Nam Hải và PGS. TS. Trương Văn Dung
Cơ sở đào tạo: Viện Công nghệ sinh học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam
xem chi tiết tại đây.
TÓM TẮT NHỮNG KẾT LUẬN MỚI CỦA LUẬN ÁN
- Đã biểu hiện thành công gen ha1, ha1-2 của virus cúm A/H5N1 dưới dạng dung hợp với gen trx có vị trí cắt của enterokinase và thrombin (trx-te-ha1, trx-te-ha1-2) trong E. coli BL21. Ở quy mô bình tam giác, trong môi trường LB, nhiệt độ 30oC, nồng độ chất cảm ứng IPTG 0,5 mM. Protein TrxHA1E tái tổ hợp được tổng hợp chủ yếu ở dạng thể vùi, hàm lượng protein tái tổ hợp đạt 126 mg/l. Hiệu giá HI trung bình huyết thanh gà gây miễn dịch bằng TrxHA1E đạt 2,2-2,8 log2.
- Đã biểu hiện thành công gen ha1, ha1-2 dung hợp với gen trx trong nấm men P. pastoris dưới dạng có (trx-te-ha1, trx-te-ha1-2) và không có vị trí cắt của enterokinase và thrombin (trxha1, trxha1-2). Hiệu suất biểu hiện gen trxha1, trxha1-2 cao hơn so với trx-te-ha1, trx-te-ha1-2. Khả năng sinh đáp ứng miễn dịch của các protein tái tổ hợp Trx-TE-HA1, TrxHA1, TrxHA1-2 tương đương nhau. Điều kiện thích hợp cho quá trình biểu hiện gen trxha1: môi trường BMMGY, pH 5-6, nồng độ methanol cảm ứng 1%. Hàm lượng TrxHA1 dịch lên men biểu hiện quy mô bình tam giác và trong nồi lên men 10 lít đạt 14 mg/L và 84 mg/L.
- Với liều gây miễn dịch 100 µg protein tái tổ hợp, hiệu giá HI trung bình huyết thanh gà sau 2 tuần gây miễn dịch nhắc lại bằng đường tiêm đạt 7,0-7,2 log2, đường nhỏ mắt mũi đạt 6,6-7,0 log2.