Thông tin luận án tiến sĩ - Chuyên ngành Sinh lý học Người và Động vật

Tên đề tàiNghiên cứu sản xuất kháng thể đơn dòng kháng polyhedrin nhằm ứng dụng chế tạo bộ sinh phẩm chẩn đoán MBV ở tôm sú

Chuyên ngành: Sinh lý học Người và động vật         Mã số: 62 42 30 01

Nghiên cứu sinh:       Nguyễn Thị Giang An

Cán bộ hướng dẫn:   PGS.TS. Đinh Duy Kháng - Viện Công nghệ sinh học

                                  PGS.TS. Đỗ Khắc Hiếu - Viện Công nghệ sinh học

Cơ sở đào tạo:          Viện Công nghệ sinh học, Viện Khoa học & Công nghệ Việt Nam


TÓM TẮT NHỮNG KẾT LUẬN MỚI CỦA LUẬN ÁN

  1. Từ mẫu tôm nhiễm MBV sau khi sàng lọc, polyhedrin đã được tinh chế bằng li tâm siêu tốc, nằm ở phân đoạn urografin 50%, có kích thước 20-30 nm và trọng lượng phân tử 58 kDa. Protein này được tinh sạch để làm nguồn kháng nguyên gây miễn dịch cho chuột.

  2. Đã tinh chế được virion của MBV đặc trưng cho virus gây bệnh trên tôm sú Việt Nam và đã xác định hình thái học của chúng trên kính hiển vi điện tử. Kết quả phân tích hình thái cho thấy virion có dạng hình que, đường kính 69,8 nm và chiều dài 298 nm.

  3. Toàn bộ gen mã hóa polyhedrin (gen polhed) của MBV gây bệnh trên tôm sú Việt Nam đã được tách dòng, xác định trình tự và phân tích. Trình tự này đã được đăng ký trên GenBank với mã số JN604546. Trên cơ sở đó, polyhedrin tái tổ hợp (Polh) đã được biểu hiện trong chủng E.coli BL21 starTM (DE3) và tinh sạch thành công.

  4. Kháng nguyên polyhedrin tự nhiên và tái tổ hợp sau khi gây miễn dịch cho chuột thuần chủng BALB/c, những cá thể đáp ứng miễn dịch tốt nhất đã được chọn lọc. Kháng huyết thanh của chúng phản ứng đặc hiệu với polyhedrin của MBV thông qua phản ứng Dot blot, Wester blot và hóa mô miễn dịch.

  5. Đã sàng lọc được 2 dòng tế bào lai (hybridoma) sinh kháng thể đơn dòng kháng polyhedrin. Từ đó xây dựng được qui trình sản xuất kháng thể đơn dòng. Đã tinh sạch được 14,7 ml kháng thể đơn dòng kháng polyherdrin (nồng độ 2,056 mg/ml).

  6. Bước đầu nghiên cứu xây dựng bộ sinh phẩm chẩn đoán MBV bằng kỹ thuật hóa mô miễn dịch và miễn dịch huỳnh quang có khả năng phát hiện sớm, đặc hiệu với MBV.