Tên đề tài: Nghiên cứu tạo streptokinase tái
tổ hợp
Chuyên ngành: Hóa sinh học
Nghiên cứu sinh: Vũ Hồng Diệp
Cán bộ hướng dẫn: PGS. TS Nguyễn
Thị Ngọc Dao, PGS. TS. Quyền Đình Thi.
Cơ sở đào tạo: Viện Công nghệ
sinh học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam
TÓM TẮT NHỮNG KẾT LUẬN MỚI CỦA LUẬN ÁN
1. Đã phân lập được chủng Streptococcus
pyogenes DT7 của Việt Nam mang gene mã hóa streptokinase
(GenBank: GQ247718);
2. Nhân dòng, phân tích trình tự gene mã hóa streptokinase từ
Streptococcus pyogenes
DT7 (GenBank: EU872448) cho thấy độ tương đồng cao
(99,6%) so với gene mã hóa streptokinase từ S.
pyogenes MGAS10750
(GenBank: CP000262);
3. Tạo
được chủng E. coli và P. pastoris tái tổ hợp
có khả năng sinh tổng hợp streptokinase với năng suất
tương ứng 7591 U/mL và 2374 U/mL dịch nuôi cấy; Đã khảo
sát được các điều kiện nuôi cấy cho các chủng này
là:
-
E.
coli tái tổ hợp: 10
giờ nuôi cấy, nhiệt độ 25°C, pH 7,0 và nồng độ chất
cảm ứng 0,5 mM IPTG;
-
P.
pastoris tái tổ hợp: 30 giờ nuôi cấy, nhiệt độ
28°C, pH 5,5 và nồng độ
chất cảm ứng 1,25% methanol.
4. Đã
tinh sạch và nhận diện protein tái tổ hợp là
streptokinase; streptokinase tái tổ hợp có hoạt tính hoạt
hóa plasminogen; đã
nghiên cứu ảnh hưởng của 4 yếu tố nhiệt độ, pH,
dung môi và chất tẩy rửa tới hoạt độ và độ bền
của streptokinase tái tổ hợp: bền ở nhiệt độ thấp
(4°C); pH tối ưu 7,0; isopropanol có ảnh hưởng tăng nhẹ
hoạt độ SK ở nồng độ thấp (10%); không thích hợp
trong môi trường có các ion kim loại Ag+,
Ca2+,
Co2+,
Cu2+,
Fe2+,
K+,
Mn2+,
Ni2+,
Zn2+
và EDTA; các chất tẩy rửa Triton X-100, Tween 80 và Tween
20 có tác dụng hoạt hóa SK mạnh; sau khi hoạt hoá,
streptokinase tái tổ hợp có hoạt độ riêng tăng gấp
hơn 2 lần và bền hơn streptokinase từ hãng Sigma.
